大鼠自身免疫性腎小球腎炎模型誘導(dǎo)方案

大鼠自身免疫性腎小球腎炎模型誘導(dǎo)

背景簡(jiǎn)介：

Goodpasture綜合征是一種由腎臟和肺部針對(duì)腎小球基底膜（GBM）的自身抗體引起的自身免疫性疾病，表現(xiàn)為嚴(yán)重的腎臟疾病和肺出血。患者自身抗體識(shí)別IV型膠原（NC1）α鏈（α1-α6）的非膠原結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包含GBM。更具體地說(shuō)，主要的Goodpasture抗原在人類(lèi)中被鑒定為IV型膠原α3鏈的NC1結(jié)構(gòu)域[α3（IV）NC1]，并在幾種動(dòng)物模型中得到證實(shí)。此外，Kohda等人報(bào)告稱，通過(guò)用重組α4（IV）NC1片段免疫Wistar Kyoto（WKY）大鼠或免疫抗α4（IV）NC1抗體，可以在WKY大鼠中誘導(dǎo)這種疾病模型。

為了誘導(dǎo)大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腎小球腎炎，Chondrex提供了兩種免疫方案，分別為抗IV型膠原NC1片段抗體和IV型膠原NC1片段誘導(dǎo)的腎炎。大鼠抗α4（IV）NC1單克隆抗體可以通過(guò)單次腹腔（IP）或靜脈（IV）注射誘導(dǎo)腎炎。Chondrex，股份有限公司還提供小鼠和大鼠腎NC1片段作為ELISA抗原，以量化自身抗體對(duì)免疫牛NC1片段的交叉反應(yīng)性。

操作流程：

IV型膠原NC1片段誘導(dǎo)的大鼠腎小球腎炎

1）動(dòng)物選擇：7-8周齡WKY品系大鼠。對(duì)模型的敏感性與WKY大鼠亞系，供應(yīng)商和實(shí)驗(yàn)設(shè)施有關(guān)。

2）免疫原：用1ml 0.05mol/L的PBS （Ph7.4）溶解IV型膠原NC1片段（cat#1102,1mg）

3）乳劑制備：用IV型膠原NC1片段與弗氏佐劑（CFA, 1mg/ml,cat#7008）等體積混合制備乳劑。

注意：乳劑混完后，滴一滴到水中檢測(cè)乳劑質(zhì)量，如果散開(kāi)表明質(zhì)量不好，需要重新制備

4）免疫：大鼠尾根部皮下注射200ul制備好的乳劑。

注意：第七天加強(qiáng)免疫對(duì)一些低敏感品系，誘發(fā)腎炎模型是有效的。如果加強(qiáng)免疫應(yīng)該用IFA佐劑和IV型膠原NC1片段配成的乳劑去誘導(dǎo)，而不是CFA佐劑，尾根部皮下免疫200ul。研究者應(yīng)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，比如免疫時(shí)間，劑量和供應(yīng)商等。

5）模型評(píng)估：

免疫后，建議觀察大鼠至35天。每周進(jìn)行16小時(shí)蛋白尿評(píng)估，以確認(rèn)腎炎模型的嚴(yán)重程度。推薦使用Chondrex 大鼠尿蛋白檢測(cè)試劑盒（cat#9040）,進(jìn)行蛋白尿測(cè)定。易感WKY大鼠的蛋白尿在14-21天可以檢測(cè)到，在21-28天達(dá)到高峰。

WKY 大鼠（雌性，7周）免疫IV型膠原NC1片段和CFA配成的乳劑后，尿蛋白水平變化，從第10天檢測(cè)到蛋白尿，持續(xù)到第28天。

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